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大腸埃希氏菌計數(四)平板計數法及結果報告


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大腸埃希氏菌計數(四)平板計數法及結果報告大腸埃希氏菌平板計數法是利用大腸埃希氏菌在VRBA-MUG上顯藍白色熒光,來計數大腸埃希氏菌的,相比于MPN法,操作過程更加簡單,但此種方法,不適用于貝類。
1、 傾注平板
首先,取VRBA、VRBA-MUG培養基,按照標簽說明進行稱量溶解,將VRBA、VRBA-MUG培養基,置于微波爐上加熱煮沸滅菌,煮沸2-3次,之后放置于45℃±0.5℃水浴鍋中備用。
選取2個~3個適宜的連續稀釋度的樣品勻液,本次采用原液、-1、-2梯度的樣品勻液進行實驗,每個稀釋度接種2個無菌平皿,每皿1 mL。同時取1 mL稀釋液加入無菌平皿做空白對照。同時采用已知MUG陽性菌株(如大腸埃希氏菌25922)和產氣腸桿菌(如ATCC 13048)做陽性和陰性對照。
將10 mL~15 mL冷至45℃±0.5℃的結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)傾注于每個平皿中(注意:傾注時的溫度不能過高,否則會發生菌株死亡)。小心旋轉平皿,將培養基與樣品勻液充分混勻。(注意1:可在需傾注的平皿下方疊放一個空平皿,防止桌面太待瓊脂凝固后,再加3 mL~4 mL VRBA-MUG覆蓋平板表層,凝固后翻轉平板,36℃±1℃培養18 h~24 h。
2、 平板菌落數的選擇
選擇菌落數在10 CFU~100 CFU之間的平板,暗室中360 nm~366 nm波長紫外燈照射下,計數平板上發淺藍色熒光的菌落。
3、 大腸埃希氏菌平板計數的報告
兩個平板上發熒光菌落數的平均數乘以稀釋倍數,報告每g(mL)樣品中大腸埃希氏菌,以CFU/g(mL)表示。若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長,則以小于1乘以最低稀釋倍數報告。

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