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大腸埃希氏菌計數(一)樣品處理和初發酵試驗


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大腸埃希氏菌計數(一)樣品處理和初發酵試驗一、樣品稀釋
1.固體和半固體樣品:稱取25 g樣品,放入盛有225 mL磷酸鹽緩沖液的無菌均質杯內, 8000 r/min~10000 r/min均質1 min~2 min,制成1:10樣品勻液,或放入盛有225 mL磷酸鹽緩沖液的無菌均質袋(HBJ001含225ml磷酸鹽緩沖液均質袋)中,用拍擊式均質器拍打1 min~2 min制成1:10的樣品勻液。
2.液體樣品:以無菌吸管吸取25 mL樣品置盛有225 mL磷酸鹽緩沖液的無菌錐形瓶(瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠)中,充分混勻,制成1:10的樣品勻液。
注意:樣品勻液的pH值應在6.5~7.5之間,必要時分別用1 mol/L NaOH或1 mol/L HCl調節。
3.用1 mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1 mL,沿管壁緩緩注入9 mL磷酸鹽緩沖液的無菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面),振搖試管或換用1支1 mL無菌吸管或吸頭反復吹打,使其混合均勻,制成1:100的樣品勻液。
二、初發酵試驗
每個樣品,選擇3個適宜的連續稀釋度的樣品勻液(液體樣品可以選擇原液),每個稀釋度接種3管月桂基硫酸鹽胰蛋白胨(LST)肉湯每管接種1 mL(如接種量超過1 mL,則用雙料LST肉湯),36℃±1℃培養24 h±2 h。
三、結果觀察
觀察小倒管內是否有氣泡產生,24 h±2 h產氣者進行復發酵試驗,如未產氣則繼續培養48 h±2 h。產氣者進行復發酵試驗。

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