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標準菌株的活化、保存及使用


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標準菌株的活化、保存及使用我們在進行培養基的驗證時,需要用到各種陽性菌株,可由菌種保藏中心(如ATCC、CMCC、CICC等)購買獲得,也可使用商業化菌株或樣品分離的特征典型菌株。直接從菌種保藏中心購買菌株通常定義為0代菌株,而商業化菌株一般僅做為工作菌株使用,商家提供的報告上通常也會寫明代數。接收菌株后,應建立起菌株管理臺賬,記錄菌株的購買日期、來源、代數等信息。本次就來講一講菌株的接收與管理。
1.活化
在收到從菌種保藏中心購買獲得的零代標準菌株后,首先要按照說明書接種至相應的培養基,在適宜條件下進行培養活化后,得到一代菌株的培養物。
2.純度和特性檢驗
然后需要對活化成功的一代菌進行純度和特性檢驗確認,菌株的純度通常以平板上的菌落形態進行觀察,若出現不同形態的菌落,說明菌株被污染,需重新挑取單個菌落進行純化。菌株的形態可通過革蘭氏染色后鏡檢觀察,初步判斷菌株是否正確。菌株的特性可通過生化反應進行判斷和記錄。
3.保存
之后我們可以采用甘油管、瓷珠菌種保藏管或制成凍干粉等方法將一代菌株置于超低溫冰箱或液氮罐中冷凍長期保存,稱為標準儲備菌株。
4.使用及傳代
取出保存的一代標準儲備菌株迅速解凍,接種至相應的培養基,在合適的條件先培養活化后,得到二代菌株的培養物,此時依然要對菌株的純度和形態進行確認,無污染變異后,可直接制備測試使用的工作菌株,也可以同樣采用一代標準儲備菌株的保存方法,保存為二代儲備菌株。
用相同的方法活化二代儲備菌株后,檢查菌株的純度和形態,可重復以上保存方法,制成三代、四代儲備菌株進行保存,也可直接制備測試使用的工作菌株。通常最終制作的工作菌株不要超過五代。保存儲備菌株時,也可使用斜面冷藏短期保存,但此方法通常1-3個月需進行傳代活化一次。
5.建立菌株臺賬
實驗室還應建立菌株臺賬,記錄菌株的活化、保存、傳代、驗證、使用及銷毀。

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