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陰溝腸桿菌的分離與鑒定


陰溝腸桿菌分離瓊脂(ECIA)

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陰溝腸桿菌的分離與鑒定奶粉中陰溝腸桿菌的污染一直受到人們的關注,本視頻以《SN/T 2552.7-2010 乳與乳制品衛生微生物學檢驗方法 第7部分:陰溝腸桿菌檢驗》為依據,詳細講述一下陰溝腸桿菌的分離與鑒定操作。
1.分離:輕輕混勻增菌液,用下列方法進行平板接種:
(1)直接涂布法:每份增菌液取0.2 mL加到2個陰溝腸桿菌分離瓊脂平板(ECIA),每個平板0.1 mL,用無菌玻璃涂布棒涂布(如果預計奶粉中含有大量的細菌,應使用滅菌的EE肉湯將增菌液稀釋10-4~10-6后涂布)。
(2)直接劃線法:每份增菌液用3 mm接種環(10 μL)分別接種2個陰溝腸桿菌分離瓊脂平板,三區法或四區法劃線,以得到單個菌落。將平板倒置于36℃±1℃,培養18 h~22 h。
觀察平板上陰溝腸桿菌的典型形態,在陰溝腸桿菌分離瓊脂平板上:黃色菌落,圓形,凸起,直徑2 mm~3 mm。
2.初步鑒定:從陰溝腸桿菌分離瓊脂平板上挑取5個可疑菌落,分別進行初步生化試驗:賴氨酸脫羧酶、鳥氨酸脫羧酶、精氨酸雙水解酶試驗。
3.對賴氨酸脫羧酶陰性、鳥氨酸脫羧酶陽性、精氨酸雙水解酶陽性的可疑菌落,進行革蘭氏染色,氧化酶試驗。
4.對革蘭氏染色陰性,氧化酶試驗陰性的可疑菌落進行KCN生長試驗、蔗糖、衛矛醇、棉子糖、D-山梨醇、黃色素試驗。
5.若出現以上生化結果KCN生長試驗+、蔗糖+、衛矛醇(-)、棉子糖+、D-山梨醇+、黃色素試驗-,即可報告檢出陰溝腸桿菌。

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