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口腔支原體固體平板法及染色鏡檢


支原體瓊脂培養基(含精氨酸)

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口腔支原體固體平板法操作步驟:
1.培養基的配制及滅菌:按標簽說明稱取海博支原體瓊脂培養基(HB7025-1)加入到蒸餾水中,混勻。之后放置于滅菌鍋中,121℃滅菌15分鐘。
2.倒平板:培養基滅菌結束后,搖動均勻(注意:拿瓶口側部,避免掌心緊握瓶口上部,以免被蒸汽燙傷),之后放置于水浴鍋中冷至50℃,將預熱至室溫的馬血清添加至培養基中,混合均勻后倒平板,每板20 mL即可,為提高無菌性,還可以按標簽添加青霉素及醋酸鉈。(注意:若培養基溫度過高可能會影響血清活性,若培養基溫度過低,倒板易出現結塊)。
3.接菌:將活化的口腔支原體轉接至精氨酸支原體肉湯中稀釋10倍,之后取100 μL稀釋液涂布至平板表面,不接菌的平板作為陰性對照。使用封口膜包住平板邊緣。之后放置于36℃培養箱中培養7-14天。
結果觀察:
取平板觀察,平板由橙紅(陰性對照)變粉(陽性),且在光線下可見平板表面有微小菌落,初步判定陽性結果。將平板放置于低倍鏡下觀察,可見煎雞蛋狀菌落,核心部分較厚,向下長入培養基,周邊一層薄的透明顆粒區,可判定陽性結果。
補充-染色鏡檢:
為增加顏色對比度,可采用染色鏡檢。將結晶紫染液稀釋10倍左右,直接加入到平板上染色10秒,之后用水沖洗掉,將平板放置于顯微鏡下觀察。

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