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雙抗巧克力瓊脂平板的制備方法


雙抗巧克力瓊脂培養基

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雙抗巧克力瓊脂平板的制備方法雙抗巧克力瓊脂培養基用于嗜血桿菌和奈瑟氏菌等苛養菌的培養,需要加入脫纖維羊血和萬古霉素,多粘菌素B進行制備。
1.按照產品標簽說明,稱取8.8 g雙抗巧克力瓊脂干粉。
2.倒入盛有200 mL純化水的搪瓷缸中,然后用玻璃棒不停攪拌,直到干粉完全溶解。
3.之后將搪瓷缸放置于電磁爐上,一邊加熱,一邊攪拌,當液面完全沸騰后,立即將搪瓷缸從電磁爐上拿開,為第一次煮沸,當液面回落后立即放回電磁爐加熱,重復加熱煮沸,共煮沸2-3次,之后倒入三角瓶中,包好。
4.放置于高壓滅菌鍋中,121℃滅菌15分鐘。
5.滅菌結束后,取出培養基,待培養基冷至50℃左右時,用移液槍吸取14 mL無菌脫纖維羊血(添加量為7%),緩慢加入三角瓶中,不斷搖晃使其與培養基充分混勻;將三角瓶放置于80℃水浴中加熱10 min左右,不停搖動,直至培養基顏色變成棕色(巧克力色)。
6.待培養基冷至45℃-50℃時,用移液槍吸取一支雙抗巧克力瓊脂添加劑(含萬古霉素0.66 mg,多粘菌素B 0.84 mg),緩慢加入三角瓶中,并不斷搖晃使其與培養基充分混勻,傾入無菌平皿,備用。
7.配制好的雙抗巧克力平板應為巧克力色固體,表面平整。
檢驗原理
雙抗巧克力瓊脂培養基用于嗜血桿菌和奈瑟氏菌等苛養菌的培養,各種消化物和酵母浸出粉提供碳氮源、維生素和生長因子;淀粉能促進奈瑟氏菌的生長;氯化鈉維持均衡的滲透壓;多粘菌素、萬古霉素抑制了革蘭氏陽性菌的生長,更有利于嗜血桿菌和奈瑟氏菌的生長;瓊脂是培養基的凝固劑;脫纖維羊血提供氯化血紅素和輔酶I,血液中還含有V、X因子,這兩種因子是位于紅細胞中的,一般細菌不能利用,輕微的加熱(一般為75℃~85℃左右)使紅細胞破壞釋放出V、X因子。
注意事項
1.無菌脫纖維羊血必須提前從冰箱中取出,待其恢復至室溫后使用。
2.加入羊血和抗生素時需注意不斷搖晃三角瓶,使其與培養基充分混勻。
3.80℃水浴中加熱后可以不加雙抗巧克力瓊脂添加劑(含萬古霉素0.66 mg,多粘菌素B 0.84 mg),直接倒平板,即為巧克力瓊脂平板,也可用于培養苛養菌。

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