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雞毒支原體靈敏度的測試方法


雞毒支原體培養基基礎

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雞支原體靈敏度的測試方法1.培養基的配制及物品的準備
配制海博雞毒支原體培養基基礎于錐形瓶中,取空試管、膠塞、0.22μm濾頭、移液槍頭、裝有10 mL蒸餾水的錐形瓶、碳酸鈉溶液包好。培養基于116℃滅菌鍋中滅菌30分鐘。其它物品于121℃的滅菌鍋中滅菌15分鐘。(注意:試管與膠塞要分開包裝滅菌,塞好塞子的試管直接滅菌可能會出現滅菌不徹底的現象,增加了污染的風險)。
2.添加血清及添加劑
滅菌結束后,待培養基冷卻至室溫后,向培養基中添加馬血清及添加劑。添加劑可使用海博雞毒支原體培養基基礎配套添加劑(HBYM329-1a)或自己配制。添加劑的配制方法為:稱取輔酶I 0.1 g、L-半胱氨酸0.1 g、精氨酸0.4 g添加至10 mL無菌水中配制成濃度分別為0.01 g/mL、0.01 g/mL、0.04 g/mL的母液,混合均勻后,使用無菌注射器吸取溶液經0.22μm濾頭進行過濾除菌,之后每100 mL培養基中添加1 mL的添加劑母液。將培養基分裝至試管中。
3.調節pH
接種雞毒支原體前需先將培養基pH至7.6~7.8,用ph儀,測試培養基的ph為7.54,可添加適量的碳酸鈉至培養基中,使培養基ph在7.6~7.8之間。本次確定碳酸鈉平均添加量為10 μL。向每支試驗用試管中添加10 μL碳酸鈉并震蕩均勻。(注意:均使用滅菌后的碳酸鈉以避免誤差)。
4.接種雞毒支原體
接種雞毒支原體于培養基中混合均勻記為-1,并做梯度稀釋至-9,設兩支未接種的培養基為陰性對照管。使用封口膜封口,之后放置于36℃±1℃的培養箱中培養5-7天。
5.結果觀察
培養第5天,靈敏度為9。

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