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創傷弧菌的檢驗(合集)


3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂
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創傷弧菌的檢驗 初步檢測:
1、樣品制備:按照標準進行取樣。
2、增菌:按標準方法進行增菌,培養后PNCC增菌液混濁。按照標準流程進行取樣,并使用PNCC增菌液進行增菌。然后進行分離。
3、分離:用10 μL接種環在距離PNCC增菌液的液面下1 cm沾取一環增菌液,分別劃線接種于CC和mCPC平板,于36℃±1℃條件下培養18 h±1 h。典型的創傷弧菌可以發酵纖維二糖產酸使培養基變黃,所以在CC和mCPC平板上的形態為:圓形、扁平,中心不透明但邊緣透明的黃色菌落。

4、分純培養

從CC平板和mCPC平板上各挑取至少5個創傷弧菌可疑菌落,分別接種于3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板上,36℃±1℃培養18 h±1 h后用于后續鑒定。

 創傷弧菌在3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板上應為:直徑1 mm~2 mm,圓形、乳白色菌落。

5、鑒定

(1)初步鑒定:挑取分純后的同一個單菌落,進行以下4項鑒定實驗。

①革蘭氏染色鏡檢 ②氧化酶試驗 ③三糖鐵試驗 ④嗜鹽性試驗

革蘭氏染色和氧化酶實驗詳見往期視頻,創傷弧菌應為:.....

①革蘭氏染色鏡檢:革蘭氏陰性,棒狀、弧狀、卵圓狀等多種形態,無芽胞。

②氧化酶試驗:氧化酶試紙變藍,為陽性。

③三糖鐵試驗:挑取純化后的同一個單菌落,劃線接種于3%氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面并穿刺底層,36℃±1℃培養24 h,觀察結果。

試管底層變黃,無氣泡,斜面顏色不變黃。

④嗜鹽性試驗:挑取純化后的同一個單菌落分別接種于含有0%、3%、6%、8%、和10%氯化鈉的胰蛋白胨水中,36℃±1℃培養24 h,觀察液體的混濁情況。

創傷弧菌在含有0%、8%、和10%氯化鈉的胰蛋白胨水中不生長或微弱生長,胰蛋白胨水澄清透亮或稍混濁,而在3%和6%氯化鈉的胰蛋白胨水中生長旺盛,胰蛋白胨水混濁。



確證鑒定:

1、將初步鑒定為創傷弧菌的疑似菌落接種在3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板上,36℃±1℃培養18 h±1 h。2、取一支3%氯化鈉VP半固體生化管掰開,備用,挑取純培養的菌落穿刺接種于生化管中,36℃±1℃培養24 h~48 h。然后滴加vp試劑A液和B液0.5-4h后觀察結果。

3、挑取一環再次經過純化的可疑菌落至生理鹽水管中,振蕩混勻制成菌懸液,然后用移液槍吸取100uL菌懸液接種于含3%氯化鈉的賴氨酸脫羧酶生化管中,然后吸取適量液體石蠟,覆蓋表層。36℃±1℃培養24 h。4、另取一環純培養的可疑菌落接種于3%氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面,36℃±1℃培養18 h。培養結束后,挑取三糖鐵斜面上的菌落,接種于ONPG生化管中,36±1℃需氧培養24小時。


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