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蛋白質毒素結晶試驗


0.5%堿性復紅溶液

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蛋白質毒素結晶試驗 什么是蛋白質毒素結晶試驗:
在GB4789.14標準中,在進行蠟樣芽胞桿菌鑒定時蠟樣芽胞桿菌與蘇云金芽孢桿菌生化反應相同,但蘇云金芽孢桿菌在形成芽孢的同時,會在芽孢旁形成一顆菱形、方形或不規則形的堿溶性蛋白質晶體,稱為伴孢晶體,該晶體易被堿性染料著色,因此常用0.5%堿性復紅染料進行染色觀察。而蠟樣芽胞桿菌和其他芽孢桿菌不產生伴孢晶體。這個染色實驗就是蛋白質毒素結晶試驗。

操作步驟:

培養芽孢:將待測菌株接種至硫酸錳營養瓊脂平板,30±1℃培養24±2h,并于室溫放置3-4天。若芽孢產生不豐富,可在室溫繼續放置2-3天后觀察。
原理:芽孢桿菌在營養條件缺乏時,開始形成芽孢,因此在進行細菌產芽孢相關試驗時,通常需進行5-7天的放置或培養,待培養基內營養耗盡,可獲得更豐富的芽孢。
制片染色:挑取培養物少許于載玻片上,滴加蒸餾水混勻并涂成薄膜。經自然干燥,微火固定后,加甲醇作用 30 s 后傾去,再通過火焰干燥,于載玻片上滴滿 0.5%堿性復紅,放火焰上加熱(微見蒸氣,勿使染液沸騰)持續 1 min~2 min,移去火焰,再更換染色液再次加溫染色 30 s,傾去染液用潔凈自來水徹底清洗、晾干后鏡檢。觀察有無游離芽胞(淺紅色)和染成深紅色的菱形蛋白結晶體。
(注:在菌苔生長密集的地方營養消耗更快,更容易產生芽孢,因此挑取密集生長處的菌苔制片易觀察到更多芽孢)



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