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培養基的檢驗與驗收(五)選擇性液體計數培養基的檢驗與驗收


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培養基的檢驗與驗收(五)選擇性液體計數培養基的檢驗與驗收一、選擇性液體計數培養基的介紹
在GB4789.28中,列舉了三個選擇性液體計數培養基:月桂基硫酸鹽胰蛋白胨大豆肉湯(LST)、煌綠乳糖膽鹽肉湯(BGLB)和EC肉湯,此類培養基主要用于特定菌株的MPN法計數,培養基本身具有一定的選擇性,同時目標菌在培養基中可觀察到產氣反應,以此進行判斷所檢目標菌是否存在。
二、培養基的出廠檢驗
首先,將待測培養基(本次以BGLB培養基為例進行講解)。按照說明書進行配制及滅菌,注意每管中需加入一個小倒管,用來觀察是否產氣。
使用前應觀察倒管內是否存在氣體,若倒管內存在氣體,應排氣后再使用。
1.目標菌的檢驗
按照GB4789.28標準,本次目標菌為大腸埃希氏菌和弗氏檸檬酸桿菌。
選擇稀釋至適宜梯度的目標菌的菌懸液(含菌量應在10-100CFU/mL,一般可選擇 -7梯度的稀釋樣液),吸取1mL加入至待測培養基試管中,接種2支平行管。
同時使用TSA(或其他適宜培養基)進行傾注,計數接種量,吸取1ml菌液,加入空平皿中,傾入TSA,混勻,放置室溫冷卻,待凝固后,再傾入一層TSA,待其凝固后 , 置于標準中規定的條件下進行培養。
2.非目標菌的檢驗
選擇稀釋至適宜梯度的非目標菌的菌懸液,含菌量應在1000-5000CFU/mL,一般可選擇 -5梯度的稀釋樣液),吸取1mL加入至待測培養基試管中,接種2支平行管,同時使用TSA(或其他適宜培養基)進行傾注(比接種梯度小1-2個稀釋度),計數接種量。
3.結果判定
接種目標菌的試管濁度值應達到2,倒管內應有氣體產生,氣體充滿倒管1/3以上。
接種非目標菌的試管濁度值應為0或1,無產氣現象。
三、培養基的驗收方法
將質控菌株(目標菌和非目標菌)都稀釋至10-3,也可采用其他方法制備含菌量105-107CFU/mL的菌懸液,使用1μL接種環挑取1環菌液,接種至待測培養基中,置于標準規定的條件進行培養。
結果判定:接種目標菌的試管濁度值應達到2,倒管內氣體充滿1/3以上;接種非目標菌的試管濁度應為0或1,無產氣現象。

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