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沙門氏菌檢驗(四)血清學鑒定實驗


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沙門氏菌檢驗(四)血清學鑒定實驗本視頻僅包含多價菌體抗原(O)鑒定和多價鞭毛抗原(H)鑒定,不含血清學分型。 將生化鑒定實驗中,明確指出要求血清學鑒定結果的疑似菌株,采用1.2%-1.5%瓊脂培養基(TSA瓊脂即可)進行培養,制成試驗用的抗原。
首先對其進行自凝性檢查,在潔凈的載玻片上滴加一滴生理鹽水,將待試培養物混合于生理鹽水滴內,使之成為均一性的混濁懸液,將玻片輕輕搖動30s-60s后,在黑色背景下觀察反應結果(必要時可用放大鏡觀察),若出現可見的菌體凝集,即認為其有自凝性,反之無自凝性。
待試菌株判定為無自凝性后,方可進行多價菌體抗原(O)鑒定和多價鞭毛抗原(H)鑒定。
在潔凈玻片上分出2個約1 cm-2 cm的區域,挑取1環待測菌,各放1/2環于劃分的每一區域上部,然后在其中一個區域下部加1滴多價菌體(O)抗血清或多價鞭毛(H)抗血清,在另一區域下部加入1滴生理鹽水作為反應對照。再用無菌的接種環或針分別將兩個區域內的菌苔研成乳狀液。將玻片傾斜搖動混合1 min,并對著黑暗背景進行觀察。
出現任何程度的凝集現象皆為陽性反應,不產生凝集呈均勻渾濁態為陰性反應。
根據多價菌體抗原(O)和多價鞭毛抗原(H)的鑒定結果,進行沙門氏菌判定。
注意事項:
(1)若在進行多價菌體抗原(O)鑒定時,O血清不凝集,需將菌株接種在瓊脂量較高的(如2%-3%)培養基上(可自行加入瓊脂進行配制)再檢查一遍。
如果是由于Vi抗原的存在而阻止了O凝集反應時,可挑取菌苔于1 mL生理鹽水中做成濃菌液,于酒精燈火焰上煮沸后再檢查。
(2)若在進行多價鞭毛抗原(H)鑒定時,H血清不凝集,需將菌株接種在0.55%-0.65%半固體瓊脂平板的中央(本試驗使用TSA平板),待菌落蔓延生長時,在其邊緣部分取菌檢查。

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