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沙門氏菌檢驗(三)生化實驗


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沙門氏菌檢驗(三)生化實驗首先,進行三糖鐵試驗和賴氨酸脫羧酶試驗。
煮沸三糖鐵瓊脂培養基2-3次,分裝試管后于121℃高壓滅菌鍋中滅菌15分鐘,此后制成高層斜面,斜面與底層比例為2:3。(注意:若培養基滅菌前不煮沸會造成瓊脂溶解不完全,在制備斜面時會出現不凝固或凝固不完全的現象。)
自選擇性瓊脂平板上分別挑取2個以上典型或可疑菌落(示例BS平板上有兩種疑似菌落),接種三糖鐵瓊脂,先在斜面劃線,再于底層穿刺(注意若先穿刺再劃線可能會導致含菌量太高,干擾結果判別);
接種針不要滅菌,直接接種賴氨酸脫羧酶試驗培養基(同時做氨基酸脫羧酶對照試驗,均加滅菌石蠟覆蓋培養基液面)和營養瓊脂平板,于36℃±1℃培養18 h~24 h,必要時可延長至48 h。本管變紫色,對照管變黃色,為陽性;本管與對照管均變黃色為陰性。
三糖鐵試驗現象觀察:若為黃色,則為產酸,記為A;若為紅色,則為產堿,記為K;若底層變黑,則為硫化氫陽性;若出現氣泡或斷層,則為產氣陽性。在三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗培養基內,沙門氏菌屬的反應結果見表2?芍狟S平板上的兩種(菌1和菌2)菌株均為可疑沙門氏菌屬。

之后,進行靛基質試驗、尿素酶試驗、氰化鉀試驗
從營養瓊脂平板上挑取單個菌落至無菌生理鹽水中,混勻細菌懸液,每個生化管加入100 μL菌懸液。于36 ℃±1 ℃培養18 h~24 h,必要時可延長至48h,注意蛋白胨水試驗結果觀察前需加Kovacs氏靛基質試劑2-3滴,有紅色環為陽性,不變色或黃色為陰性;尿素瓊脂紅色為陽性,不變色或黃色為陰性;進行氰化鉀試驗的同時需做氰化鉀試驗對照,氰化鉀對照生長,溶液變渾濁時,氰化鉀不生長為陰性,生長為陽性。
之后按表3判定結果。將已挑菌落的平板儲存 于2 ℃~5 ℃或室溫至少保留24h,以備必要時復查。

由表3可知,菌1表現為A1序號且無異常項,因此判定為沙門氏菌屬,如尿素、KCN 和賴氨酸脫羧酶3項中有1項異 常,按表4可判定為沙門氏菌。如有2項異常為非沙門氏菌。

菌2表現為A3序號,需補做ONPG。ONPG黃色或深黃色為陽性,無色為陰性。ONPG陰性為沙門氏菌,同時賴氨酸脫羧酶陽性,甲型副傷寒沙門氏菌為賴氨酸脫羧酶陰性。由于菌2為ONPG陰性且為賴氨酸脫羧酶陰性,因此為甲型副傷寒沙門氏菌。
此外,若疑似菌株表現為A2序號,需補做甘露醇和山梨醇試驗,沙門氏菌靛基質陽性變體兩項試驗結果均為陽性,但需要結合血清學鑒定結果進行判定。

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