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支原體簡介和常見問題

蔡向榮
錄入時間:2017-3-15 15:13:00 來源:青島海博生物

一、簡介:


   支原體的大小為0.1~0.3um,可通過濾菌器,常給細胞培養工作帶來污染的麻煩。菌落。ㄖ睆0.1-1.0mm),在固體培養基表面呈特有的"油煎蛋"狀。無細胞壁,不能維持固定的形態而呈現多形性,對滲透壓敏感,對抑制細胞壁合成的抗生素不敏感。革蘭氏染色不易著色,故常用Giemsa染色法將其染成淡紫色。細胞膜中膽固醇含量較多,約占36%,對保持細胞膜的完整性具有一定作用。細胞膜含甾醇,比其他原核生物的膜更堅韌。凡能作用于膽固醇的物質(如兩性霉素B、皂素等)均可引起支原體膜的破壞而使支原體死亡。

   支原體基因組為一環狀以雙鏈DNA,分子量。▋H有大腸桿菌的五分之一),合成與代謝很有限。

   肺炎支原體的一端有一種特殊的末端結構(terminal structure),能使支原體粘附于呼吸道粘膜上皮細胞表面,與致病性有關。

生化反應與分型:

   一般能分解葡萄糖的支原體則不能利用精氨酸,能利用精氨酸的則不能分解葡萄糖,據此可將支原體分為兩類。解脲支原體不能利用葡萄糖或精氨酸,但可利用尿素作能源。

   各種支原體都有特異的表面抗原結構,很少有交叉反應,具有型特異性。應用生長抑制試驗(Growth inhibition test,GIT)、代謝抑制試驗(Metabolic inhibition test,MIT)等可鑒定支原抗原,進行分型。

   它廣泛分布于自然界,有80余種。與人類有關的支原體有肺炎支原體(M-pneumonie,Mp)、人型支原體(UU 分解尿素支原體)和生殖器支原體(M.genitalium,MG)等。

   肺炎支原體引起肺炎,F已從人類泌尿生殖道分離出來7種支原體,其中分離率較高而與泌尿生殖道疾病有關,是解脲支原體,其次是人型支原體。人型支原體(M.humenis,MH)、解脲支原體(Ureaplasma urealyticum,UU)和生殖器支原體(M.genitalium,MG)都會引起泌尿生殖道感染。

    自然界中廣泛存在絕大多數生長需膽固醇,在遺傳上與細菌無關,且無論在什么條件下也不能變成細菌菌落較小,0.1~0.3mm。

培養條件:

   營養要求比一般細菌高,除基礎營養物質外還需加入10~20%人或動物血清以提供支原體所需的膽固醇。最適pH7.8~8.0之間,低于7.0則死亡,但解脲支原體最適pH6.0~6.5。

   大多數兼性厭氧,有些菌株在初分離時加入5%CO2生長更好。生長緩慢,在瓊脂含量較少的固體培養基上孵育2~3天出現典型的“荷包蛋樣”菌落:圓形(直徑10~16um),核心部分較厚,向下長入培養基,周邊為一層薄的透明顆粒區。此外,支原體還能在雞胚絨毛尿囊膜或培養細胞中生長。

二、常見問題:

   1、你好,請問我想要根據藥典2010三部做支原體檢測,需要哪些培養基?精氨酸支原體肉湯培養基的作用是什么? 藥典上說用支原體肉湯培養基,想問問是否帶精氨酸,還有支原體瓊脂培養基是需要含精氨酸嗎?我們是檢測看我們的培養的細胞是不是支原體污染了

   答:1) 藥典2010三部做支原體檢測需要支原體半流體培養基和支原體肉湯培養基(或支原體瓊脂培養基)。

   作驗證試驗時:支原體肉湯培養基是用來培養肺炎支原體,利用葡萄糖變黃,則有肺炎支原體的生長,如果要分離,則接種到支原體瓊脂培養基上。

   精氨酸支原體肉湯培養基是用來培養口腔支原體,利用精氨酸變紅,則有口腔支原體的生長,如果要分離,則接種到精氨酸支原體瓊脂培養基上。

   2)支原體肉湯培養基和支原體瓊脂培養基不含精氨酸。

   3)支原體的生長現象是觀察液體是否變色,培養后的液體仍是澄清,不是變混濁生長,如果變混濁生長,說明有細菌污染,正常是抑制細菌生長的。

   2、想分離支原體。不知如何選擇培養基?

   答:首先應確定分離哪種支原體。是利用葡萄糖、精氨酸,還是尿素?

       利用葡萄糖的支原體:肺炎支原體----支原體肉湯培養基;

       利用精氨酸的支原體:口腔支原體、唾液支原體、人型支原體----精氨酸支原體肉湯培養基;

       利用尿素的支原體:T株支原體(解脲支原體)—--解脲支原體培養基

       雞毒支原體------改良Frey培養基

       用于固體培養時:以上支原體都可以接種于支原體瓊脂培養基上。

   3、改良Frey培養基是直接用于培養支原體嗎?

   答:用于培養滑液支原體及其他禽支原體用。

   4、那如果有支原體的話是不是改良Frey培養基液體會變色呢?
   答:是的,改良Frey培養基中含有葡萄糖和苯酚紅,當支原體利用葡萄糖時會產酸,使pH值下降,溶液顏色變黃,且溶液是澄清的。

   5、我們是用來培養山羊支原體的,一直沒培養出來

   答:可能培養條件不夠,例血清質量不好;CO2濃度為5%-10%、N2濃度為95%時生長良好。

   6、你好,我剛才在你們網站搜支原體培養基,發現有多種,解脲支原體培養基100ml 600元,但是支原體培養基礎250g300元。用支原體培養基礎可以培養解脲脲原體嗎。

   答:可以的;我們的解脲支原體培養基是生產好的成品培養基,可直接使用。

   7、您好,我想問一下,我配的培養基養支原體泛粉紅是什么原因?

   答:培養基含有苯酚紅,用來觀察支原體是否生長?若變色且溶液是澄清的,可以判為有支原體生長。

   8、請問您那里有支原體培養基的平板嗎?

   答:建議你們自己制作,因為培養時間長,平板易失水。

   9、你好,我們公司最近做支原體檢測,PCR法,但是藥典方法也想做一下看到藥典的支原體檢測方法,看到你家有支原體肉湯培養基,想問一下,你們公司是否針對你們的產品進行過支原體肉湯培養基的靈敏度檢測同時,以前定的培養基都是北京中檢所指定的,但是他們沒有支原體肉湯培養基,但是有其他的針對相關支原體的培養基。
   答:做過靈敏度試驗,肺炎支原體達到10-8變色單位,口腔支原體達到10-4變色單位。

   10、咨詢一下,支原體肉湯培養基針對的支原體有哪幾種?還是所有支原體均可培養?
   答:利用葡萄糖的支原體,例肺炎支原體等。

   11、支原體一般培養一般需要多長時間?
   答:支原體培養的時間比較長,生長快的T株支原體約需培養1-3天。中等生長的約需7-14天,慢的約需21-30天。

   12、想買肺炎支原體培養基,HB7025-3支原體瓊脂培養基,不是可以培養肺炎支原體呀?
   答:HB7025-3 支原體瓊脂培養基,是支原體固體平板培養法,可以培養肺炎支原體和口腔支原體。

   13、HB7025-2支原體肉湯培養基用法中“青霉素80萬單位是什么意思,指代不明確

   答:青霉素80萬單位,是指青霉素的效價單位而不是重量單位。購買青霉素時在包裝上都有說明。

   14、培養雞毒支原體和豬肺炎支原體用哪種培養基比較好?
   答:培養雞毒支原體用改良Frey培養基;培養豬肺炎支原體用支原體肉湯培養基或豬支原體培養基。

   15、還有與PPLO肉湯配合用的培養基的資料能提供些嗎?我現在需要復蘇和傳代肺炎支原體。
   答:復蘇可用sp4葡萄糖肉湯培養基,傳代用sp4葡萄糖瓊脂培養基。

   16、問一下支原體固體培養基這個能檢測雞的支原體嗎?

   答:可以。

   17、想檢測細胞培養過程中,是否有支原體污染,可以用哪些培養基?

   答:有,可以用支原體肉湯培養基和支原體半流體培養基。

   18、支原體生長培養基顏色有什么變化? 

   答:支原體肉湯培養基和精氨酸支原體肉湯培養基配方中都含有苯酚紅。若有支原體生長時,會使培養基pH值下降或上升,所以培養基顏色變黃(支原體肉湯培養基)或變紅(精氨酸支原體肉湯培養基)。

   19、支原體培養基基礎這個含有精氨酸和不含精氨酸的有什么區別,我們想要一種廣譜的支原體培養基,建議是用含精氨酸的還是不含精氨酸的? 

   答:廣譜支原體培養基就不能用含有苯酚紅的培養基,可以用支原體半流體培養基或支原體瓊脂培養基。

   20、支原體培養基基礎是添加馬血清,青霉素那些還是支原體添加劑? 

   答:支原體培養基基礎中不含馬血清和青霉素,需在基礎培養基高壓滅菌后添加馬血清和無菌青霉素溶液。

   21、請問有支原體的菌株嗎? 

   答:沒有。

   22、請問 您這里有雞毒支原體基礎培養基么? 

   答:有,改良Frey培養基。

   23、我看公司的幾種支原體培養基,成分有所不同,具體怎么回事兒呢? 

   答:針對不同來源的支原體,采用不同成份的支原體培養基,這樣有利于不同來源支原體的生長和培養。

   24、哪個是用于牛羊支原體的培養基? 

   答:可以HB8572-2支原體培養基,中國獸藥標準。

   25、你們公司有沒有檢測禽源疫苗的支原體培養基? 

   答:有,改良FREY氏培養基。

   26、請問你們的支原體基礎培養基配好之后能夠鑒別支原體嗎? 

   答:不能,可以做一些生化鑒定,例葡萄糖、精氨酸、尿素、TTC還原、紅細胞吸附等試驗。

   27、有支原體菌落形成圖片嗎 ?

   答:

   28、我看你們有多種支原體培養基,我不知道該買那種我看其他人做支原體培養,先用液體的,再用固體的。我上次直接買了固體的,我打算培養支原體,需要增菌培養。用液體的,需要買那種? 

   答:1)支原體肉湯培養基 是用來培養肺炎支原體,利用葡萄糖變黃,則有肺炎支原體的生長,如果要分離,則接種到支原體瓊脂培養基上。精氨酸支原體肉湯培養基是用來培養口腔支原體,利用精氨酸變紅,則有口腔支原體的生長,如果要分離,則接種到精氨酸支原體瓊脂培養基上。

   29、你好,你那里有用做支原體生化鑒定的培養基么? 

   答:有,可以做

   1)TTC還原試驗:肺炎支原體菌落呈粉紅色或深紅色;

   2)葡萄糖、精氨酸、尿素試驗;

   3)3%紅細胞吸附試驗:用雞的紅細胞,其中肺炎支原體、口腔支原體I和III型為吸附,陽性。

   注:本文屬海博生物原創,未經允許不得轉載。

 

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