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食品衛生微生物學檢驗蠟樣芽胞桿菌檢驗



錄入時間:2015-4-29 11:32:20 來源:青島海博生物

操作步驟

樣品處理:

  冷凍樣品應在45℃以下不超過15 min或在2℃~8℃不超過18 h解凍。若不能及時檢驗,應放于-15℃左右保存;

  非冷凍而易腐的樣品應盡可能及時檢驗。若不能及時檢驗,應置于2℃~8℃冰箱保存,在24 h內檢驗。

樣品制備

  以無菌操作取樣品25 gmL),加入PBS 225 mL,用旋轉刀片式均質器以8000 r/min10000 r/min均質1 min2 min,或拍擊式均質器拍擊2 min。如無均質器,則將樣品放入無菌乳缽中磨碎,然后稱取25 gmL)置合適的容器中,加225 mL PBS,充分振蕩混勻。制成1:10的樣品勻液。

增菌

  取110的樣品勻液10 mL(液體樣品可以選擇原液),加入90 mL胰酪胨大豆多粘菌素肉湯中,于30 ℃±℃培養24 h±2 h。

分離

  取胰酪胨大豆多粘菌素增菌液劃線接種于MYP瓊脂平板上。于30 ℃±℃培養24 h48 h。觀察平板上生長的菌落。在MYP瓊脂平板上,典型菌落為灰白色至微粉紅色,周圍有白色至淡粉紅色沉淀環。

純培養

  從每個平板選取至少5個典型或可疑菌落,劃線接種于營養瓊脂平板做純培養,30 ℃±℃培養24 h±2 h,進行確證實驗。營養瓊脂平板上,典型菌落在為灰白色,偶有黃綠色,不透明,表面粗糙似毛玻璃狀或融蠟狀,邊緣常呈擴展狀,直徑為4 mm10 mm;

樣品的稀釋

     吸取110的樣品勻液1 mL加到裝有9 mL PBS的稀釋管中,充分混勻制成1100的樣品勻液。據對樣品污染狀況的估計,按上述操作,依次制成十倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋1次,換用11mL無菌吸管或吸頭。

平板計數

  選擇23個適宜的連續稀釋度的樣品勻液(液體樣品可以選擇原液),每個稀釋度分別吸取0.1mL接種到MYP瓊脂平板上,每稀釋度接種兩個MYP瓊脂平板。用無菌L棒涂布整個平板,注意不要觸及平板邊緣。使用前,如MYP瓊脂平板表面有水珠,可放在25℃ ~ 50℃的培養箱里干燥,直到平板表面的水珠消失。

  涂布后,將平板置于30 ℃±℃培養24 h±2 h后(原標準為36 ℃±℃培養12 h20 h) ,選取具有15個~150個典型或可疑蠟樣芽胞桿菌菌落的平板,進行計數。并計算同一稀釋度兩個平板的平均菌落數。如果菌落不典型,可繼續培養18 h24 h再計數。

  計數后,從每個平板選取至少5個已計數的典型或可疑菌落,如果一個平板上少于5個典型或可疑菌落,則取所有典型或可疑菌落,分別劃線接種于營養瓊脂平板, 30 ℃±℃培養24 h±2 h,進行確證實驗。

  根據確證實驗確定為蠟樣芽胞桿菌的菌落數,按比例計算出該平板上蠟樣芽胞桿菌菌落數,然后計算同一稀釋度兩個平板的平均蠟樣芽胞桿菌數,再乘其稀釋倍數,再乘以10,即得每gmL)樣品中蠟樣芽胞桿菌數并作出報告。

 

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