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植物組培之花粉培養



錄入時間:2011-12-30 9:32:47 來源:互聯網

 

   花粉培養是指把花粉從花藥中分離出來,以單個花粉粒作為外植體進行離體培養的技術。由于花粉已是單倍體細胞,誘發它經愈傷組織或胚狀體發育成的植株都是單倍體植株。且不受花藥的藥隔、藥壁、花絲等體細胞的干擾。但缺點是較比花粉培養難度大。

 

 2.1花粉的分離

 

 取新鮮未開的花蕾用自來水沖冼10min,以75%的酒精消毒1015min,無菌水沖冼2次,再用10%漂白粉上清液浸泡20min,無菌水沖冼34次。然后將花藥放到加有基本培養基的小燒杯中,用注射器的內管在燒杯的壁上擠壓花藥,使花粉從花藥中釋放出來。用尼龍篩過濾掉藥壁組濾液再經低速離心(100160rpm),上面的碎片可用吸管吸掉,再加入新鮮培養基。連續進行兩次過濾,到每毫升含103104個花粉的濃度就可以了。

 

 簡單的方法是花粉從花藥中擠出后,用鑷子取出花粉空殼,放在培養基上培養。此法適于微室栽培,但往往有藥壁等體細胞混入。

 

 2.2花粉的預處理

 

 ①低溫處理

 

在花粉第一次有絲分裂期進行低溫處理。②重力的作用

 

在從花蕾中取出花藥前1小時,在5℃條件下進行低溫離心機離心,可提高單倍體的誘導率。

 

 2.3培養基成分

 

在花粉培養中可添加一些物質,有促進生長的作用。培養基選用Nitsch作基本培養基,含有諸如硝酸鈣、硫酸、檸檬酸鐵、酵母浸出液和椰子胚乳等。

 

  2.4花粉培養方法

 

 ①微室培養法

 

 取含有5080;ǚ鄣囊坏闻囵B液放在微室培養裝置中,為了防止花粉破裂,應在低倍條件(4℃以下)接種,然后在20℃下培養。

 

 ②看護培養法

 

在裝有50ml液體培養基的小培養皿中,用解剖針撕開花藥釋放出花粉,形成花粉懸浮液,最后稀釋至0.5ml培養基中,含有10個花粉粒的細胞懸浮液。看護培養時,把花藥放在瓊脂培養基表面上,然后在每個花藥上覆蓋一小塊圓片濾紙。用移液管吸取1滴已準備好的花粉粒懸浮液,滴在每個小圓片濾紙上。培養在25℃和一定光照強度下,大約一個月長出細胞群。由于完整的花藥發育過程釋放出有利于花粉發育的物質,并通過濾紙供給花粉,促進了花粉的發育。

 

 

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