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植物組培之花藥培養



錄入時間:2011-12-30 9:31:14 來源:互聯網

 

花藥培養

 

 花藥培養改變花粉的發育程序,使其分裂形成細胞團,進而分化成胚狀體,產后再生植株,或形成愈傷組織,由愈傷組織再分化成植株。

 

 1.1 花藥的材料選擇

 

一般選擇單核期 此時細胞核較大居中,稱單核中央期。隨著細胞體積迅速增大,細胞核由中央位置推向一邊,即單核靠邊期。以上均為單核期花粉。

 

單核期的確定 根據細胞觀察推測,雙核期的花粉中開始積累淀粉,不能使花粉發育成植株。通常采用醋酸洋紅或碘化鉀染色,再壓片鏡檢,以確定花粉的發育時期。但是接種前不可能把所有的花粉都進行一次發育時期的鏡檢,通常是按照花蕾長度大小與花粉發育年齡的相關性,在實際操作中取一定大小的花蕾進行的。如水稻選擇劍葉葉枕抽出距下一葉,葉枕約為46cm的孕穗稻。

 

 1.2培養基的選擇

 

花藥培養所采用的培養基是MS、N6、B5等。添加的激素有6-BA、KT和玉米素, 2.4-D,NAAIAA等。誘導愈傷組織的培養基可添加2.4-D,其濃度為13mg/l,分化培養基可添加23mgBA,再加少許的IAA0.20.5mg/l),生根培養基可單獨添加生長素(0.5 1mg/l)。

 

基本培養基中的蔗糖濃度對花粉的誘導生長有一定作用。在辣椒花藥培養中以6%的蔗糖濃度對胚狀體的誘導率為最高。

 

 1.3消毒接種培養

 

花藥消毒,從健壯無病植株采集花蕾,因為未開放的花蕾中的花藥為花被包裹,本身處于無菌狀態,可僅用70%酒精棉球將花的表面擦洗即可。也可按對其它器官消毒處理方法進行,先用70%的酒精浸一下后,在飽和漂白粉溶液中浸1020min,或用0.1%升汞液消毒710min,然后用無菌水洗35次。

 

消毒前預處理,將花蕾剪下放入水中,在冰箱45℃下保持34天。低溫貯藏后,花藥容易發生胚狀組織。接種時把花蕾用解剖刀、鑷子小心剝開,取出花藥,注意去掉花絲,然后散落接種到培養基上,一個10ml的試管可接種20個花藥。

 

培養條件:培養溫度在2328℃左右,每天1116h的光照,光照強度20004000lx。

 

培養歷程:脫分化培養時,可用MS+2.4D的培養基,或N6+2.4D的培養基,經1030天,可誘導生成愈傷組織,或少數生成胚狀體。愈傷組織增殖到13mm左右時,應轉移到加有細胞分裂素和微量生長素的新的分化培養基上,再經2030天,可獲花粉植株。

 

1.4花藥培養中的花粉發育過程

 

①營養細胞發育途徑

 

在花藥離體培養中,花粉第一次有絲分裂形成不均等的營養核和生殖核。生殖核較小,一般不分裂或只分裂12次,就逐步退化。而體積大的營養核經多次分裂且形成了細胞壁,最后變成了多細胞團,迅速生長,很快實破細胞壁,細胞不斷分裂,可以產生胚狀體或愈傷組織。

 

 ②生殖細胞發育途徑

 

在這種途徑下,營養核只分裂12次就退化了,而生殖核經多次分裂發育成多細胞團。

 

 ③營養細胞和生殖細胞同時發育的途徑

 

 花粉第一次有絲分裂形成的營養核和生殖核同時進行多次分裂,因此最后形成的多細胞團包括兩部分,一部分細胞較大的是由營養細胞分裂而來;另一部分細胞較小的是由生殖細胞分裂而來。

 

 ④花粉均等分裂途徑

 

 花粉進行均等分裂形成兩個均等的子核,以后二核間產生壁,形成兩個子細胞,由兩個子細胞形成多細胞團,迅速生長,穿破藥壁而形成胚狀體或愈傷組織。

 

 

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