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復方野馬追膠囊的體內抑菌抗病毒實驗研究



錄入時間:2011-1-4 9:47:32 來源:中國論文下載中心

【摘要】    目的 觀察復方野馬追膠囊的體內抑菌及抗副流感病毒作用。方法采用體內實驗,觀察復方野馬追膠囊對鏈球菌感染小鼠的保護作用;以副流感病毒感染小鼠,觀察實驗中小鼠生存時間、死亡率及肺指數和肺組織病變程度。結果復方野馬追膠囊體內有明顯的抑菌和抗副流感病毒作用,能明顯降低鏈球菌感染小鼠的死亡率,明顯延長副流感病毒感染小鼠的生存時間,顯著降低肺指數,減輕肺組織病變程度。結論復方野馬追膠囊體內有明顯的抑菌和抗副流感病毒作用。
【關鍵詞】  復方野馬追膠囊; 鏈球菌; 副流感病毒
  Abstract:ObjectiveTo study the antibacterial and antiviral effect of Fufangyemazhui Capsule in vivo. MethodsThe death rate in streptococcus affected mice treated with Fufangyemazhui Capsule was observed. The influences on life time, death rate and lung index of mice infected by parainfluenza virus were observed. ResultsFufangyemazhui Capsule obviously  decreased the death rate of mice infected by streptococcus and remarkably prolonged life time, decreased lung index and inhibited the lung consolidation of mice infected by parainfluenza virus. ConclusionFufangyemazhui Capsule has antibacterial and antiviral effect on parainplueuza virus.
  Key words: Fufangyemazhui Capsule;  Streptococcus;  Parainfluenza virus
    復方野馬追膠囊為江蘇省中醫藥研究院根據臨床經驗方研制的治療流行性感冒的中藥復方制劑,其主藥為野馬追。野馬追為菊科植物輪葉澤蘭Eupatorium lindleyanum DC.的干燥地上部分,此藥材在歷代本草中均沒有記載,但卻是蘇北民間久已沿用的清熱解毒藥。本院科研人員前期對野馬追藥材的活性成分及藥理作用進行了系統研究,發現其對于多種病毒在體內外均顯示良好的抗病毒作用,且動物實驗證實此藥材具有明顯的鎮咳祛痰功效。在大量前期實驗研究的基礎上,根據我院名中醫的臨床經驗方,我院研制了用于治療流感的中藥新藥復方野馬追膠囊。本文對中藥制劑復方野馬追膠囊的體內抑菌和抗副流感病毒進行了實驗研究,為此新制劑進入臨床提供實驗依據。
  1  材料
  1.1  供試品供試藥物:復方野馬追膠囊(干粉),每克含生藥材量為13.67 g, 批號060310,江蘇省中醫藥研究院提供,臨用前以蒸餾水配制成所需濃度的混懸液。陽性對照藥利巴韋林片(國藥準字H19999460,批號0506262),揚州中寶制藥有限公司產品;阿莫西林膠囊(Amoxicillin,Amo),山東魯抗醫藥集團魯原有限公司產品,國藥準字XF19992098,批號L041104。臨用前以蒸餾水配制成所需濃度的混懸液。小柴胡沖劑,杭州尖峰德康藥業有限公司產品,國藥準字Z33020926,批號051004。
  1.2 實驗菌CMCC32171鏈球菌,由中國藥科大學微生物學教研室提供。
  1.3 病毒副流感病毒(仙臺株)尿囊液,由中國藥科大學微生物學教研室提供。
  1.4 細胞狗腎傳代細胞(MDCK細胞株)由中國藥科大學微生物學教研室保存,以含15%小牛血清的DMEM培養液傳代。
  1.5 動物KM小鼠,♀♂各半,清潔級,購于上海斯萊克實驗動物有限責任公司,合格證號:SCXK(滬)2003-0003。飼養環境為清潔級,合格證號:SYXK(蘇)2002-0007。
  2 方法與結果[1~5]
  2.1  體內抑菌實驗
  2.1.1  藥液配制方法 臨用前用蒸餾水配成含生藥量為0.4,0.2,0.1 g/ml的混懸液供小鼠灌胃用,給藥體積為20 ml/kg,即給藥劑量為8.0,4.0,2.0 g生藥/kg體重。
  2.1.2  感染菌液制備取生長良好的鏈球菌,肉湯培養6h,離心,沉淀以5%酵母混懸液稀釋至所需濃度,供腹腔注射染菌用。菌液濃度經預試驗確定,小鼠ip菌液 0.1 ml/10 g的最小致死量(100% MLD)為1.2×107 cFu/ml。
2.1.3  抑菌實驗結果小鼠120只,雌雄各半,空腹稱重,隨機分為6組,模型對照組、復方野馬追膠囊8.0,4.0,2.0 g生藥/kg組、阿莫西林膠囊100 mg/kg組、小柴胡沖劑5.0 g/kg組。各組分別灌胃給藥, 給藥體積為0.2 ml/10 g,給藥后1h腹腔染菌:ip菌液(1.2×107 cFu/ml)0.1 ml/10 g。第1次給藥后12 h,各組按上述劑量再給藥1次。觀察染菌后24 h內各組小鼠的死亡情況。結果見表1。
由表1可見,復方野馬追膠囊大、中、小劑量組小鼠感染鏈球菌后24 h內死亡率均比對照組明顯降低,大劑量組與空白對照組比較有顯著性差異(P<0.05)。表明復方野馬追膠囊對鏈球菌感染小鼠具有一定的保護作用。表1  復方野馬追膠囊對鏈球菌感染小鼠的影響(略)
  2.2  復方野馬追膠囊對副流感病毒感染小鼠的死亡保護作用取健康KM小鼠100只,♀♂各半,隨機分為7組:復方野馬追膠囊8.0 g生藥/kg組、復方野馬追膠囊4.0 g生藥/kg組、復方野馬追膠囊2.0 g生藥/kg組、利巴韋林100 mg/kg組、小柴胡沖劑5 g/kg組、病毒對照組及正常對照組。病毒感染方法:小鼠ip 30 mg/kg戊巴比妥鈉 0.1 ml/10 g體重,麻醉后于鼻腔內接種相當于2~5 倍LD50的含副流感病毒的雞胚尿囊液0.03 ml/只。
    給藥方法:各給藥組于病毒感染前2 h ig 1次,以后2次/d,給藥體積0.2 ml/10 g,共給藥5 d。病毒對照組及正常對照組按同法給予等體積蒸餾水。
   
  自病毒感染后連續觀察15 d,逐日觀察并記錄小鼠發病和死亡數,計算死亡率、死亡保護率、平均存活天數及生命延長率。結果見表2。表2  復方野馬追膠囊對小鼠副流感病毒感染死亡保護作用(略)
  由表2結果可見,復方野馬追膠囊對副流感病毒引起肺炎的小鼠有保護作用,能明顯延長感染小鼠的生存時間,以8.0 g生藥/kg劑量組的統計學差異最為顯著。
  2.3   復方野馬追膠囊對副流感病毒感染小鼠肺指數的變化及肺病變程度的影響實驗分組方法、染毒及給藥方法都同死亡保護實驗。感染后第6天,禁食4 h,稱體重。處死小鼠,取出全肺,用生理鹽水洗凈,并用干凈濾紙吸掉殘余鹽水,稱肺重。計算肺指數(每 100 g 體重的肺質量 ,即肺指數 = 肺質量/ 體重×100)和肺指數抑制率(%)= (病毒對照組平均肺指數 - 實驗組平均肺指數)/ 病毒對照組平均肺指數 ×100 % ,與對照組比較進行組間 t 檢驗(見表3)。另取肺組織,福爾馬林固定,HE染色,進行病理檢驗。表3 復方野馬追膠囊對小鼠副流感病毒感染肺指數影響(略)
  由表3結果可見,復方野馬追膠囊大劑量組(8.0g生藥/kg)對小鼠副流感病毒引起的肺炎有明顯的治療作用,能顯著降低肺指數(P<0.05~0.01)。病理組織學檢查結果表明,副流感病毒肺炎模型感染成功。主要表現為支氣管炎、間質性肺炎和肺膿腫形成。復方野馬追膠囊具有抗副流感病毒所致肺部感染疾病的作用。其中復方野馬追膠囊高劑量組形態與利巴韋林組接近。病理照片見圖1~7。
 
  3  小結
    江蘇地產藥材野馬追是菊科(Compsitae)植物輪葉澤蘭(Eupatorium lindleyanum)的干燥地上部分;ㄊ⑵诓墒,除去雜質,曬干。野馬追有化痰止咳、清熱解毒、利尿消腫、降壓的功能,用于感冒、咳嗽多痰、頭疼、扁桃體炎、菌痢、高血壓病。其總黃酮與總生物堿有鎮咳作用;生物堿對豚鼠離體回腸有明顯松弛作用,還具降壓功效;黃酮類化合物能增高白細胞數;乙醇與乙醚提取部分對離體回腸有顯著的抗組胺作用;100%煎液可分別抑制流感桿菌、甲型鏈球菌、金黃色葡萄球菌及卡他球菌。野馬追地上部分含揮發油0.024%,莖葉為0.025%,花為0.078%。此外含黃酮類、生物堿類、香豆素類、倍半萜內酯類等成分[6]。野馬追曾收入《中國藥典》(1977年版),收入江蘇省地方藥材標準(1988年)。早在1971年,江蘇省衛生廳組織“野馬追”科研協作組,開展對野馬追有效成分的提取分離、化學分析、藥理、臨床等方面的研究工作,獲得了較好的成果,并進一步研制成野馬追片劑、野馬追糖漿等制劑應用于臨床,取得了良好的臨床療效。江蘇省中醫藥研究院科研人員于2002年開始對野馬追的化學成分、藥理功效進行了一系列的深入研究,并在此基礎上,采用現代中藥提取手段和制劑工藝將本院名中醫的臨床經驗方研制成為復方野馬追膠囊。
根據實驗結果可見,復方野馬追膠囊灌胃給藥對鏈球菌感染小鼠有明顯保護作用,而且對小鼠副流感病毒引起的肺炎有明顯的治療作用,能明顯延長感染小鼠的生存時間,顯著降低肺指數,并減輕肺組織病變程度。這為本品的臨床療效提供了豐富的實驗依據,并為進一步進行臨床研究打下了堅實的基礎。
作者:彭蘊茹,竇潔,黃芳,錢大瑋《時珍國醫國藥》
【參考文獻】
   。1]徐叔云,卞如濂,陳修,等.藥理實驗方法學[M].北京:人民衛生出版社,2002:1664,1740.
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 。3]H.G. 沃格爾,杜冠華,李學軍,等.藥理學實驗指南-新藥發現和藥理學評價[M].北京:科學出版社,2001.
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[6]國家中醫藥管理局.中華本草[M].上海:上?萍汲霭嫔,1999:6876.

 

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