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抗生素微生物檢定——管碟法 1



錄入時間:2008-12-1 16:52:02 來源:青島海博生物

  抗生素微生物檢定系在適宜條件下,根據量反應平行線原理設計,通過檢測抗生素對微生物的抑制作用,計算抗生素活性(效價)的方法。它包括兩種方法,管碟法和濁度法。 
  測定結果經計算所得的效價,如低于估計效價的90%或高于估計效價的1105時,應調整其估計效價,重新試驗。除另有規定外,本法的可信限率不得大于5%。 
  管蝶法系利用抗生素在瓊脂培養基內的擴散作用,比較標準品與供試品兩者對接種的試驗菌產生抑菌圈的大小,測定供試品效價的一種方法。 
1、菌懸液的制備 
(1)枯草芽孢桿菌懸液取枯草芽孢桿菌的營養瓊脂斜面培養物,接種于盛有營養瓊脂培養基的培養瓶中,在35—37℃培養7d,用革蘭染色法涂片鏡檢,應有芽孢85%以上。用滅菌水將芽孢洗下,在65℃加熱30min,備用。 
(2)短小芽孢桿菌懸液取短小芽孢桿菌的營養瓊脂斜面培養物,照上述方法制備。 
(3)金黃色葡萄球菌懸液:取金黃色葡萄球菌的營養瓊脂斜面培養物,接種于營養瓊脂斜面上,在35—37℃培養20—22h。臨用時,用滅菌水或0.9%滅菌氯化鈉溶液將菌苔洗下,備用。 
(4)藤黃微球菌懸液取藤黃微球菌的營養瓊脂斜面培養物,接種于盛有營養瓊脂培養基的培養瓶中,在26—27℃培養24h,或采用適當方法制備的菌斜面,用培養基III或0.9%滅菌氯化鈉溶液將菌苔洗下,備用。 
(5)大腸埃希菌懸液取大腸埃希菌的營養瓊脂斜面培養物,接種于營養瓊脂斜面上,在35—37℃培養20—22h。臨用時,用滅菌水將菌苔洗下,備用。 
(6)啤酒酵母菌懸液取啤酒酵母菌V的號培養基瓊脂斜面培養物,接種于IV號培養基瓊脂斜面上。在32—35℃培養24h,用滅菌水將菌苔洗下置含有滅菌玻璃珠的試管中,振搖均勻,備用。 
(7)肺炎克雷伯菌懸液取肺炎克雷伯菌的營養瓊脂斜面培養物,接種于營養瓊脂斜面上,在35—37℃培養20—22h。臨用時,用滅菌水將菌苔洗下,備用。 
(8)支氣管炎博特菌懸液取支氣管炎博特菌的營養瓊脂斜面培養物,接種于營養瓊脂斜面上,在32—35℃培養24h。臨用時,用滅菌水將菌苔洗下,備用。 
2、標準品溶液的制備標準品的使用和保存,應照標準品說明書的規定。 
   供試品溶液的制備:精密稱(或量)取供試品適量,用各藥品項下規定的溶劑溶解后,再按估計效價或標示量的規定稀釋至與標準品相當的濃度。 
3、雙碟的制備取直徑約90mm,高16—17mm的平底雙碟,分別注入加熱融化的培養基20ml,使在碟底 內均勻攤布,放置水平面上使凝固,作為底層。另取培養基適量加熱融化后,放冷至48—50℃(芽孢可至60℃),加入規定的試驗菌懸液適量(能得清晰的抑菌圈為度。二劑量法標準品溶液的高濃度所致的抑菌圈直徑在18—22mm,三劑量法標準品溶液的中心濃度所致的抑菌圈直徑在15—18mm),搖勻,在每一雙碟中分別加入5ml,使在底層上均勻攤布,作為菌層。放置在水平臺上冷卻后,在每一雙碟中以等距離均勻安置不銹鋼小管(內徑6.0mm士0.1mm,高10.0mm士0.1mm,外徑7.8mm士0.1mm)4個(二劑量法)或6個(三劑量法),用陶瓦圓蓋覆蓋備用。 
4、檢定法 
(1)二劑量法取照上述方法制備的雙碟不得少于4個,在每一雙碟中對角的2個不銹鋼小管中分別滴裝高濃度及低濃度的標準品溶液,其余2個小管中分別滴裝相應的高低兩種濃度的供試品溶液;高、低濃度的劑距為2:1或4:1。在規定條件下培養后,測量各個抑菌圈直徑(或面積),照生物檢定統計法中的法進行可靠性測驗及效價計算。 
(2)三劑量法取照上述方法制備的雙碟不得少于6個,在每一雙碟中間隔的3個不銹鋼小管中分別滴裝高濃度(S3)、中濃度(S2)及低濃度(S1)的標準品溶液,其余3個小管中分別滴裝相應的高、中、低3種濃度的供試品溶液;高、低濃度的劑距為1:0.8。在規定條件下培養后,測量各個抑菌圈直徑(或面積 ),照生物檢定統計法中的(3.3)法進行可靠性測驗及效價計算。   
   

 

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