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目的基因的高效分泌型表達



錄入時間:2023-10-27 14:46:50 來源:青島海博生物

大腸桿菌是最常用的宿主細胞,但大腸桿菌沒有能力將所表達的蛋白質產物分泌到胞外,一般在胞內形成包含體。包含體的分離需要細胞破碎,而且包含體不溶于水,也沒有生物活性。一般需要重新溶解并折疊復性后才具有生物活性。這一過程時間很長而且活性收率往往很低。為了克服這一缺點,如果在質粒設計時就加上一段信號肽基因,就有可能實現目標蛋白質的分泌型表達。目的基因的分泌型表達有兩種情形:目標蛋白分泌到細胞周質中或目標蛋白轉運到細胞周質后,再分泌到細胞外。

常用的大腸桿菌信號肽有PhoA,LamB,OmpA和STII的導肽。通過與這些導肽的融合,已經有多種蛋白質實現了分泌型表達,如:人生長激素,人干擾素,人表皮生長因子,牛生長因子等。但是,目標蛋白與信號肽的融合并不能保證產物一定會分泌到胞外,分泌到細胞周質中的目標蛋白也不一定是可溶的。通過添加非代謝性糖和降低表達速率能增加其溶解性。對于以大腸桿菌作為宿主細胞的表達系統而言,要順利實現分泌型表達還有許多問題有待于解決。

另一類分泌型表達系統則從破壞細胞壁的結構著手。例如:將目標蛋白和細胞壁裂解酶基因同時轉化到宿主細胞中,在細菌生長到一定階段后加入誘導劑后,在目標蛋白質開始表達的同時,細胞壁裂解酶也開始表達并破壞細胞壁的結構,使表達的目標蛋白質釋放到胞外。這種方法已經在基因工程菌生產聚羥基烷酸時取得成功。

 

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