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選擇性增菌培養基的出廠檢驗及驗收方法

紀旭艷
錄入時間:2023-9-12 15:46:07 來源:青島海博生物

一、選擇性增菌培養基的介紹

 在分離特定的目標菌時,若樣品中存在較多的干擾菌,直接分離會比較困難,而選擇性增菌培養基的主要作用是盡可能抑制雜菌的生長,讓目標菌得到較多的增殖,逐漸稱為優勢群體,則可以很好的提高檢出率。


二、培養基的出廠檢驗

   待測培養基制備:按照說明書進行配制,分裝至試管,每管10mL。

1.混合菌的接種

菌懸液制備:將質控菌株接種至非選擇性肉湯或平板中進行活化培養,使用生理鹽水或磷酸鹽緩沖液進行十倍系列稀釋至適宜梯度。

接種及培養:向待測試管中接種10-100CFU的目標菌,以及1000-5000CFU的非目標菌,接種總體積為1mL,同時分別使用TSA對目標菌和非目標菌進行接種量的計數,置于標準中規定的條件下進行培養。

例:檢驗7.5%氯化鈉肉湯,需在試管中接種10-100CFU的金黃色葡萄球菌和1000-5000CFU的大腸埃希氏菌,可將金黃色葡萄球菌制成約10-100CFU/mL的菌懸液,大腸埃希氏菌制成約10000-50000CFU/mL的菌懸液,吸取0.9mL金黃色葡萄球菌菌液及0.1mL大腸埃希氏菌菌液至7.5%氯化鈉肉湯中,金黃色葡萄球菌菌液可直接使用TSA傾注計數接種量,大腸埃希氏菌菌液需進行百倍稀釋后,吸取1mL菌液用TSA傾注計數接種量。將接種后的培養基置36±1℃培養18-24h。

2.非目標菌的接種

菌懸液制備:將質控菌株接種至非選擇性肉湯或平板中進行活化培養,使用生理鹽水或磷酸鹽緩沖液進行十倍系列稀釋至含菌量為1000-5000CFU/mL。

接種及培養:吸取1mL制備好的菌懸液加入至待測培養基試管中,接種2支平行,置于標準中規定的條件下進行培養。

3.混合菌培養液的接種

用10μL接種環取1環經培養后的混合菌培養液,劃線接種到特定的選擇性平板上,同時每管接種一個平板。按標準方法中規定的培養時間和溫度進行培養。

例:用10μL接種環挑取1環培養后的7.5%氯化鈉肉湯混合菌測試管的培養液,劃線到Baird-parker瓊脂平板上,每支試管劃1個平板,36±1℃培養24-48h

4.非目標菌培養液的接種

吸取10μL經培養后的非目標菌培養液,涂布或傾注法接種到非選擇性平板(如TSA)上。同時每管接種一個平板,并按標準規定的培養條件培養平板。

5.結果判定

混合菌接種選擇性平板上的典型特征菌落數應>10CFU,非目標菌在非選擇性平板上菌落數應<100CFU。

解析:選擇性增菌培養基通常有較強的抑菌性,除了對非目標菌有抑制性以外,有時對目標菌的生長也具有一定的抑制性,因此在接種10-100CFU的目標菌培養結束后,經常會觀察不到明顯的生長渾濁現象,因此需要通過轉接選擇性平板觀察菌落數來確定目標菌在選擇性增菌培養基中有沒有增殖。非目標菌也是如此,通過轉接計數平板上的菌落數來判斷非目標菌在選擇性增菌培養基中有無明顯的增殖。


三、培養基的驗收方法

將質控菌株接種至非選擇性肉湯培養基中過夜培養,稀釋至10-3,也可采用其他方法制備含菌量105-107CFU/mL的菌懸液,使用1μL接種環挑取1環菌液,接種至待測培養基中,置于標準規定的條件進行培養。

結果判定:接種目標菌的試管濁度值應達到2,接種非目標菌的試管濁度應為01。


注:本文屬海博生物原創,未經允許不得轉載。


 

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