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金黃色葡萄球菌的活化、保存及確認方法

王娟
錄入時間:2023-8-24 14:21:34 來源:青島海博生物

一、金黃色葡萄球菌簡介

  金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是隸屬于葡萄球菌屬的一種常見的條件致病性菌株,革蘭氏染色為陽性球菌,呈葡萄狀堆積,直徑約0.5μm,具有較強的耐鹽性,可在含10%氯化鈉的培養基中生長,是無芽孢菌中抗逆性最強的菌種之一,主要可引起傷口感染或在腸道中產毒導致腹瀉等癥狀。


二、活化方法

  培養基的選擇:金黃色葡萄球菌的生命力強,易存活,對營養要求不高,常用的非選擇性培養基大多數都可以用來對金黃色葡萄球菌活化及傳代,如營養肉湯/瓊脂、胰蛋白胨大豆肉湯/瓊脂、腦心浸液肉湯/瓊脂等。

  注:對菌種進行活化和傳代時,通常不使用甘露醇氯化鈉瓊脂、Baird-parker瓊脂、7.5%氯化鈉肉湯等選擇性培養基。

  操作方法:若菌種為凍干粉形式,按照說明書溶解后,可直接涂布或劃線至NA/TSA/BHI平板上,也可加入至NB/TSB/BHI等液體培養基中;若菌種為甘油凍存管形式,從冰箱中取出速融后,NA/TSA/BHI平板上,也可加入至NB/TSB/BHI等液體培養基中;若菌種為瓷珠形式,挑取瓷珠可轉入NA/TSA/BHI平板上,也可加入至NB/TSB/BHI等液體培養基中,30-37℃培養18-24h。


三、實驗室常用保存方法

  1.斜面保存法

  將NA/TSA/BHI等培養基制成斜面管,接種金黃色葡萄球菌后培養至菌落生長良好,置于2-8℃可保存至少1個月,超過1個月容易出現菌種老化、污染、變異等現象,建議及時傳代。

  2.脫脂牛奶/甘油/瓷珠冷凍保存法

  可挑取非選擇性培養基上培養好的金黃色葡萄球菌至脫脂牛奶/液體/瓷珠菌種保存管中制成約109CFU/mL的菌液(瓷珠保存法需搖勻后棄菌液保留瓷珠),置于冰箱或液氮罐中冷凍保存,在-70℃以下可保存兩年以上,在-20℃也能保存一年以上,金黃色葡萄球菌生命力強,很容易保存數年或數十年。


四、菌種的確認

  1.菌落特征:大多數金黃色葡萄球菌在TSA上菌落呈現圓形光滑菌落,并有黃色色素,也有少數金黃色葡萄球菌不產黃色色素。在甘露醇氯化鈉平板上由于分解甘露醇產酸,菌落呈黃色;在Baird-parker瓊脂上呈現黑色圓形菌落,通常菌落周圍會有渾濁帶及透明圈,也有少數金黃色葡萄球菌不分解脂肪,菌落周圍沒有圈。



甘露醇氯化鈉平板
Baird-parker平板
  2.革蘭氏染色:金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性無芽孢球菌,呈葡萄狀堆積。

  3.溶血:大多數金黃色葡萄球菌可以產生兩種以上的溶血素,在血平板上產生透明的β溶血環,也有少數金黃色葡萄球菌產溶血素少,在血平板上表現為弱溶血或不溶血。

  4.血漿凝固酶試驗:金黃色葡萄球菌可產生血漿凝固酶,凝固兔血漿,此反應常用來做金黃色葡萄球菌的確證試驗。



注:本文屬海博生物原創,未經允許不得轉載。

 

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