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細菌的特殊結構及其染色方法



錄入時間:2023-6-7 9:52:01 來源:青島海博生物

一、莢膜

某些細菌生活在一定的營養條件下時,會在細胞壁表面形成一層松散的粘液狀物質,稱為莢膜,一般由多糖和多肽組成。莢膜能夠保護細胞免遭干燥影響,同時也是細胞外的碳源和能源的儲備物質。當環境缺乏營養時,可被細胞利用。從臨床方面來講莢膜可以保護病原菌免遭宿主吞噬細胞的吞噬,增強其致病能力。如具有莢膜的S 型肺炎球對人體毒力強,能引起肺炎,但如果細胞失去莢膜(即成為R型菌株)后,致病力就下降。

因莢膜是由細菌細胞壁外的一層粘液性多糖類物質組成,其對染料的親和力較弱,因此不容易著色,通常采用負染色法進行染色,讓菌體和背景著色,而莢膜不著色,從而使菌體周圍呈現透明圈。

莢膜染色方法:

第一步:需要制作適當厚度的細菌涂片,涂片時可多挑些菌體與水充分混合,并將粘稠的菌液盡量涂開,但涂布的面積不宜過大,在空氣中自然干燥,不要加熱固定。

第二步:滴加適量的結晶紫染色液于載玻片上,完全覆蓋菌體,靜置染色5-7分鐘。

第三步:用20%硫酸銅水溶液沖洗涂片,沖洗要適度,2-3遍即可。

第四步:用吸水紙吸干多余的水分,并立刻滴加1-2滴香柏油,以免形成CuSO4結晶。

第五步:使用顯微鏡鏡檢觀察。

二、鞭毛

鞭毛是生長在細菌菌體表面的細長、彎曲的,具有運動功能的蛋白質附屬物。鞭毛的數目大約有一至數十條,長度約為15-20μm,直徑為0.01-0.02μm。鞭毛是細菌的運動器官,觀察細菌鞭毛對于細菌鑒定有十分重要的意義。依據鞭毛的有無、位置和數量,細菌分為無鞭毛菌、單端極鞭毛菌、單端雙鞭毛菌、單端叢鞭毛菌、周鞭毛菌、側鞭毛菌等。

一般情況下,因鞭毛較細,在光學顯微鏡下不易觀察,通常需使用電鏡進行觀察,但通過特殊染色方法使染料沉積在鞭毛上使其加粗,就可克服上述困難。

鞭毛染色方法:

第一步:挑選活力較強的幼齡細菌進行涂片,挑取菌的時候盡量不要帶有培養基,涂片的玻片必須清洗干凈,染色前可用洗衣粉洗凈并在酒精中浸泡24h,用前擦拭干凈后使用。

第二步:將菌落輕點在玻片上,傾斜玻片讓菌液自然留下,不要用接種環涂抹或用力過猛,以免破壞鞭毛。

第三步:靜置待其自然干燥。

第四步:滴加鞭毛染色液 2-3滴,在室溫中染色10分鐘。

第五步:直接用蒸餾水緩慢沖洗染液,不要先傾去染液后再水洗,以免污染背景不易觀察,沖洗時要將染液的顏色沖洗干凈否則也會影響觀察。

第六步:使用顯微鏡鏡檢觀察。鏡檢時先從邊緣開始逐漸向中間鏡檢,因為邊緣處菌量小,易觀察到單菌落,中心處菌易重疊,不易觀察。

三、芽孢

芽胞是芽胞桿菌休眠期的一種特殊形態。芽胞的形態包括芽胞形狀、芽胞位置和胞子囊膨大,芽胞形態分為圓柱形、橢圓形、球形,芽胞位置分為端生、近端生、中生或近中生。具有非常強勁的抗熱、抗化學藥物、抗輻射性能。根據芽胞的形態學可以對芽胞桿菌屬和梭菌屬進行初步鑒定。

芽孢壁厚、透性低,著色、脫色均較困難。因此,用著色力強的染色劑(如孔雀石綠)在加熱條件下進行染色時,染料不僅可以進入菌體,而且也可以進入芽孢,進入菌體的染料可經水洗脫色,而進入芽孢的染色的染料則難以透出,若再用復染液(如沙黃水溶液)染色后,芽孢仍然保留初染劑的顏色,而菌體被染成復染劑的顏色,即菌體和芽孢分別染成紅色和綠色易于區分。

芽孢染色方法:

第一步:常規涂片,待干燥后,通過火焰上方3次,進行固定。

第二步:滴加3-4滴孔雀石綠水溶液于涂片上。

第三步:用木夾夾住載玻片在火焰上持續加熱6-8s,使染液冒蒸汽但不沸騰。

第四步:待玻片冷卻后,傾去染液,水洗至不再褪色為止。

第五步:用番紅溶液復染1min,水洗至水為無色。

第六步:待其干燥后,使用顯微鏡鏡檢觀察。

 

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