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選擇性分離/計數固體培養基的出廠檢驗及驗收方法

紀旭艷
錄入時間:2023-5-11 14:48:17 來源:青島海博生物

一、選擇性分離/計數固體培養基的介紹

  選擇性分離/計數固體培養基常用于特定細菌的分離培養,通常添加有特定的抑制成分,減少非目標菌的生長,對目標菌的生長沒有影響或影響較小,達到選擇性分離的效果,大部分的選擇性培養基中同時添加有特定的底物,使目標菌生長具有特定的菌落特征、顏色反應,更容易識別所需的目標菌。


二、培養基的出廠檢驗

1.目標菌的生長率測定(定量)

  將質控菌株接種至非選擇性肉湯或平板中進行活化培養,使用生理鹽水或磷酸鹽緩沖液進行十倍系列稀釋至適宜梯度,吸取0.1mL制備好的菌懸液,分別涂布至待測培養基和參比培養基,每平板接種水平為20-200CFU,至少接種2塊平板,將接種好的培養基置于標準規定的條件下進行培養。生長率PR=NS(待測平板菌落總數)/NO(參比培養基平板菌落總數,應≥100CFU),目標菌在待測培養基上應有典型的生長和菌落特征,計數培養基的生長率應不小于0.7,分離培養基的生長率一般不小于0.5,最低應在0.1以上。

目標菌的生長率測定(定量)

2.非目標菌的特異性檢驗(定性)

  將質控菌株接種至非選擇性肉湯培養基中過夜培養,用1μL接種環挑取菌液在平板上劃平行直線或分區劃線,置標準規定的溫度培養,非目標菌應有典型的菌落外觀、大小和形態。

EMB非目標菌特異性檢驗-鼠傷寒沙門氏菌

EMB非目標菌特異性檢驗-鼠傷寒沙門氏菌

3.非目標菌的抑制性檢驗(半定量)

  用1μL接種環取選擇性測試工作菌懸液1環, 在待測培養基表面劃六條平行直線,同時接種兩個平板,按標準規定的條件進行培養,培養后計算生長指數G,每條有比較稠密菌落生長的劃線則G為1,如果僅一半的線有稠密菌落生長,則G為0.5。如果劃線上沒有菌落生長、生長量少于劃線的一半或菌落生長微弱,則G為0,記錄每個平板的得分總和便得到G。非目標菌的G值一般小于或等于1,至少應達到G<5。

EMB非目標菌抑制性檢驗-金黃色葡萄球菌(G≤1)

EMB非目標菌抑制性檢驗-金黃色葡萄球菌(G≤1)


三、培養基的驗收方法

1.目標菌的半定量測試

  將質控菌株接種至非選擇性肉湯培養基中過夜培養制成工作菌懸液,使用1μL接種環挑取1環菌液,按照標準的方法連續劃16線,置于標準規定的溫度培養,如果僅一半的線有稠密菌落生長,則G為0.5。如果劃線上沒有菌落生長、生長量少于劃線的一半或菌落生長微弱,則G為0,計算G值總和,應達到G≥6。

EMB目標菌半定量測試-大腸桿菌(G≥6)

EMB目標菌半定量測試-大腸桿菌(G≥6)

2.非目標菌的特異性、選擇性測試方法與出廠檢驗方法完全相同。


注:本文屬海博生物原創,未經允許不得轉載。


 

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