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肺炎克雷伯菌檢驗標準操作程序



錄入時間:2023-2-22 10:24:38 來源:2023年國家食品污染物和有害因素風險監測工作手冊(下卷)

1 方法來源

  ChinaPIN-2022-TZFX019《國家致病菌識別網技術手冊肺炎克雷伯菌》


2 適用范圍

  本程序規定了食品中肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)的檢驗方法。



3 培養基和試劑

  3.1 磷酸鹽緩沖液(PBS)點擊查看

  3.2 麥康凱培養基 點擊查看

  3.3 血平板 點擊查看


第一法 定性檢驗

4 檢驗程序

  肺炎克雷伯菌檢驗程序見圖1。

圖1肺炎克雷伯菌檢驗程序

圖1 肺炎克雷伯菌檢驗程序


5 操作步驟

  5.1 增菌

  以無菌操作取樣品25g(mL)加入到含有225mL PBS緩沖液 的均質袋中,在拍擊式均質器上連續均質1min~2min;或放入盛有225mL PBS緩沖液的均質杯中,8000r/min~10000r/min均質1min~2min。于36℃±1℃培養8h~18h。

  5.2 分離

  取PBS增菌液劃線接種于麥康凱平板上,于36℃±1℃培養24h~48h,觀察各個平板上生長的菌落。肺炎克雷伯菌在麥康凱培養基上形成淡粉色菌落,大而隆起,光滑濕潤,呈粘液狀(圖2),48小時候相鄰菌落易融和成膿汁樣(圖3)。

肺炎克雷伯菌在麥康凱培養基上培養24小時
肺炎克雷伯菌在麥康凱培養基上培養48小時
圖2 肺炎克雷伯菌在麥康凱培養基上培養24小時
圖3 肺炎克雷伯菌在麥康凱培養基上培養48小時
  5.3 純化

  自麥康凱平板上分別挑取3個~5個典型或可疑菌落,分別接種在血平板上純化,于36℃±1℃培養24h~48h。肺炎克雷伯菌在血平板形成白色或略透明大菌落(圖4),48h后易融合成片,形成膠水樣菌苔(圖5),不溶血,無特殊氣味產生。

肺炎克雷伯菌在血平板上培養24小時
肺炎克雷伯菌在血平板上培養48小時
圖4 肺炎克雷伯菌在血平板上培養24小時
圖5 肺炎克雷伯菌在血平板上培養48小時
  5.4 鏡檢

  肺炎克雷伯菌經革蘭氏染色后在鏡下呈現較短粗的革蘭氏陰性桿菌,單獨、成雙或短鏈狀排列,大小約為0.3μm~1.5μm×0.6μm~6μm。無芽胞,無鞭毛(圖6)。

圖6 肺炎克雷伯菌的鏡下形態特征(革蘭染色×1000)

圖6 肺炎克雷伯菌的鏡下形態特征(革蘭染色×1000)

  5.5 鑒定

  5.5.1 生化鑒定:常見的微生物生化鑒定系統,如VITEK 2(用GN卡)、BD-Phoenix100生化儀、生物梅里埃公司生產的API生化鑒定試劑條等均可鑒定肺炎克雷伯菌。

  5.5.2 微生物質譜鑒定:目前常見的微生物質譜儀均能很好地鑒定肺炎克雷伯菌。


相關產品:

磷酸鹽緩沖液 (PBS pH7.2)-點擊查看產品詳情

麥康凱瓊脂(MAC)(含結晶紫)-點擊查看產品詳情

血平皿(9cm)-點擊查看產品詳情


 

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