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菌落總數檢驗方法-化妝品安全技術規范(2022年版)



錄入時間:2022-11-28 10:01:01 來源:2022年版化妝品安全技術規范

1.范圍

  本規范規定了化妝品中菌落總數的檢驗方法。

  本規范適用于化妝品菌落總數的測定。

 

2.定義

  2.1 菌落總數Aerobic bacterial count

  化妝品檢樣經過處理,在一定條件下(如培養基、培養溫度、培養時間、pH值、需氧性質等)培養后,1g(1mL)檢樣中形成的微生物菌落總數。所得結果包括本方法規定的條件下生長的嗜中溫需氧菌和兼性厭氧菌的菌落總數。

  測定菌落總數便于判明樣品被細菌污染的程度,是對樣品進行衛生學總評價的綜合依據。

 

3.儀器和設備

  3.1 三角瓶:250mL。

  3.2 量筒:200mL。

  3.3 pH計或精密pH 試紙。

  3.4 高壓滅菌器。

  3.5 試管:18mm×150mm。

  3.6 滅菌平皿:直徑90mm。

  3.7 滅菌刻度吸管:10mL、1mL。

  3.8 酒精燈。

  3.9 恒溫培養箱:36℃±1℃。

  3.10 放大鏡。

  3.11 恒溫水浴箱。

 

4.培養基和試劑

  4.1 生理鹽水:見總則中3.1。

  4.2 卵磷脂、吐溫80-營養瓊脂培養基

  成分:
蛋白胨
20g

牛肉膏
3g

氯化鈉
5g

瓊脂
15g

卵磷脂
1g

吐溫80
7g

蒸餾水
1000mL
  制法:先將卵磷脂加到少量蒸餾水中,加熱溶解,加入吐溫80,將其他成分(除瓊脂外)加到其余的蒸餾水中,溶解。加入已溶解的卵磷脂、吐溫80,混勻,調pH值為7.1~7.4,加入瓊脂,121℃高壓滅菌20min,儲存于冷暗處備用。

  4.3 0.5%氯化三苯四氮唑(2,3,5-triphenyl terazolium chloride,TTC)

  成分:
TTC
0.5g

蒸餾水
100mL

  制法:溶解后過濾除菌,或115℃高壓滅菌20min,裝于棕色試劑瓶,置4℃冰箱備用。

 

5操作步驟

  5.1 用滅菌吸管吸取1:10稀釋的檢液2mL,分別注入到兩個滅菌平皿內,每皿 1mL。另取1mL注入到9mL滅菌生理鹽水試管中(注意勿使吸管接觸液面),并充分混勻,制成1:100檢液。更換一支吸管,吸取2mL,分別注入到兩個滅菌平皿內,每皿 1mL。如樣品含菌量高,還可再稀釋成1:1000,1:10000,......等,每個稀釋度應換1支吸管。

  5.2 將融化并冷至45℃~50℃的卵磷脂吐溫80營養瓊脂培養基傾注到平皿內,每皿約15mL,隨即轉動平皿,使檢液與培養基充分混合均勻,待瓊脂凝固后,翻轉平皿,置36℃±1℃培養箱內培養48h±2h。另取一個不加檢液的滅菌空平皿,加入約15mL卵磷脂吐溫80營養瓊脂培養基,待瓊脂凝固后,翻轉平皿,置36℃1℃培養箱內培養48h±2h,為空白對照。5.3為便于區別化妝品中的顆粒與菌落,可在每100mL卵磷脂吐溫80營養瓊脂中加入1mL0.5%TTC溶液,如有細菌存在,培養后菌落呈紅色,而化妝品的顆粒顏色無變化。

 

6菌落計數方法

  先用肉眼觀察,點數菌落數,然后再用5~10倍的放大鏡檢查,以防遺漏。記下各平皿的菌落數后,求出同一稀釋度各平皿生長的平均菌落數。若平皿中有連成片狀的菌落或花點樣菌落蔓延生長時,該平皿不宜計數。若片狀菌落不到平皿中的一半,而其余一半中菌落數分布又很均勻,則可將此半個平皿菌落計數后乘以2,以代表全皿菌落數。


7菌落計數及報告方法

  7.1 首先選取平均菌落數在30~300之間的平皿,作為菌落總數測定的范圍。當只有一個稀釋度的平均菌落數符合此范圍時,即以該平皿菌落數乘其稀釋倍數報告之(見表1中例1)。

  7.2 若有兩個稀釋度,其平均菌落數均在30~300之間,則應求出兩菌落總數之比值來決定,若其比值小于或等于2,應報告其平均數,若大于2則以其中稀釋度較低的平皿的菌落數報告之(見表1中例2及例3))。

  7.3 若所有稀釋度的平均菌落數均大于300,則應按稀釋度最高的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之(見表1中例4))。

  7.4 若所有稀釋度的平均菌落數均小于30,則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之(見表15)。

  7.5 若所有稀釋度的平均菌落數均不在30~300之間,其中一個稀釋度大于300,而相鄰的另一稀釋度小于30時,則以接近30300的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之(見表1中例6)。

  7.6 若所有的稀釋度均無菌生長,報告數為每g或每mL小于10CFU。

  7.7 菌落計數的報告,菌落數在10以內時,按實有數值報告之,大于100時,采用二位有效數字,在二位有效數字后面的數值,應以四舍五入法計算。為了縮短數字后面零的個數,可用10的指數來表示(見表1報告方式欄)。在報告菌落數為不可計時,應注明樣品的稀釋度。


  7.8 按重量取樣的樣品以CFU/g為單位報告;按體積取樣的樣品以CFU/mL為單位報告。

 

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