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肺炎克雷伯氏菌檢驗

林嬌嬌
錄入時間:2021-2-8 10:05:45 來源:青島海博生物

一、參考標準


  《SN/T 2206.3-2009 中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業標準 化妝品微生物檢驗方法 第3部分:肺炎克雷伯氏菌》。


二、生物學特征


  革蘭氏陰性桿菌,為較短粗的桿菌,大小0.5~0.8×1~2 um,單獨、成雙或短鏈狀排列。無芽胞,無鞭毛,有較厚的莢膜,多數有菌毛。營養要求不高,在普通瓊脂培養基上形成較大的灰白色粘液菌落,以接種環挑之,易拉成絲,有助鑒別。在腸道桿菌選擇性培養基上能發酵乳糖,呈現有色菌落。


三、檢驗程序


圖1 肺炎克雷伯氏菌檢驗程序


四、檢驗方法及結果


  1、增菌


  肺炎克雷伯氏菌在SCDLP液體培養基中36±1℃培養18-24h后生長渾濁。如圖2所示。


 

a:空白對照 b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117

圖2 SCDLP液體培養基培養結果


  2、選擇性分離


  自SCDLP培養液中,取1-2接種環,劃線接種于膽硫乳瓊脂平板(DHL)上,置36±1℃ 培養18-24 h。


  在DHL平板上肺炎克雷伯氏菌菌落呈淡粉紅色,大而隆起,光滑濕潤,粘液狀,相鄰菌落容易融合成膿汁樣,接種針挑取菌落時呈絲狀粘連。如圖3所示。


圖3 肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117在DHL平板上的培養結果


五、初步生化鑒定


  從DHL平板上至少挑取5個典型或可疑菌落,如果平板上可疑菌落少于5個,則全部挑取,把挑取的可疑菌落分別穿刺于動力半固體瓊脂,并接種到營養瓊脂斜面培養基,36±1℃培養18-24 h。將營養瓊脂斜面培養基上的純培養物做革蘭氏染色、氧化酶試驗。


  1、動力半固體瓊脂


  肺炎克雷伯氏菌在動力半固體培養基中無動力,延穿刺線生長。如圖4所示,相比較大腸埃希氏菌在動力半固體培養基中有動力,呈擴散生長,培養基會出現渾濁現象。


a:大腸埃希氏菌ATCC 25922 b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117

圖4 動力半固體培養基培養結果


  2、革蘭氏染色


  肺炎克雷伯氏菌染色結果為紅色,為革蘭氏陰性菌。


圖5


  3、氧化酶試驗


  肺炎克雷伯氏菌氧化酶試驗不變色,為陰性。如圖6所示,相比較銅綠假單胞菌變藍為陽性。


a:銅綠假單胞菌ATCC 9027   b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117

圖6 氧化酶試驗結果


六、后續生化鑒定


  挑取無動力,革蘭氏染色陰性,氧化酶試驗陰性的菌進行后續生化鑒定。


  1、尿素酶試驗


  劃線接種于尿素酶生化管培養基中,培養基變為粉紅色,為陽性。相比較鼠傷寒沙門氏菌不變色,為陰性。



a:空白對照  b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117  c:鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028

圖7 尿素酶鑒定試驗結果


  2、靛基質生化鑒定試驗


  將菌接種于胰蛋白水培養基中,36±1℃培養24±2h。培養結束后,滴加Kovacs氏靛基質試劑2-4滴,立即觀察現象。肺炎克雷伯氏菌為黃色環,為陰性。相比較大腸埃希氏菌為玫紅色環,為陽性。


a:空白對照  b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117  c:大腸埃希氏菌ATCC25922

圖8 靛基質鑒定試驗結果


  3、MR鑒定試驗


  用MR-VP培養基培養結束后,滴加甲基紅試劑,立即觀察現象,肺炎克雷伯氏菌顯黃色,為陰性。相比較大腸埃希氏菌顯紅色,為陽性。


a:空白對照  b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117  c:大腸埃希氏菌ATCC25922

圖9 MR鑒定試驗結果


  4、V-P鑒定試驗


  用MR-VP培養基培養結束后,滴加V-P試劑,繼續培養0.5-4 h,觀察現象。肺炎克雷伯氏菌變紅,為陽性。相比較大腸埃希氏菌為黃色,為陰性。


a:空白對照  b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117  c:大腸埃希氏菌ATCC25922

圖10 V-P鑒定試驗結果


  5、西蒙氏枸櫞酸鹽利用試驗


  劃線接種于西蒙氏枸櫞酸鹽培養基上,培養基變藍,為陽性。


a:空白對照  b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117

圖11 西蒙氏枸櫞酸鹽培養基培養結果

  

  6、賴氨酸脫羧酶鑒定試驗


  接種于賴氨酸脫羧酶肉湯生化管中,用無菌液體石蠟覆蓋培養基液面,培養18-24 h。觀察現象,肺炎克雷伯氏菌培養基呈紫色,為陽性。相比較,福氏志賀氏菌培養基呈黃色,為陰性。


a:空白對照  b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117  c:福氏志賀氏菌ATCC12022

圖12 賴氨酸脫羧酶鑒定試驗結果


  注:肺炎克雷伯氏菌生化特性見下表。



  注:本文屬海博生物原創,未經允許不得轉載。

 

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